【摘 要】
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目的：构建金黄色葡萄球菌特异性表面的弹性纤维结合蛋白(Elastin Binding Proteins of S.aureus,EbpS)N端蛋白(nEBPS)基因序列的原核表达系统,制备其多克隆抗体.方法：根据G
【机 构】
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济南军区总医院实验诊断科济南,250031
【出 处】
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全军免疫学第七届学术交流会暨免疫学新进展主题论坛
论文部分内容阅读
目的：构建金黄色葡萄球菌特异性表面的弹性纤维结合蛋白(Elastin Binding Proteins of S.aureus,EbpS)N端蛋白(nEBPS)基因序列的原核表达系统,制备其多克隆抗体.方法：根据GeneBank里报道的nEBPS基因序列设计特异性引物,PCR方法特异性扩增nEBPS基因(nebps),分别构建克隆载体pMD19-T(+)/nebps和原核表达载体pQE30(+)/nebps,经PCR、双酶切和测序鉴定后,转化大肠杆菌表达宿主菌M15[pREP4],经lmM异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后表达,表达产物用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western Bloting,WB)分析鉴定,经镍螯合亲和层析胶体(Ni-NTAAgrose)纯化,再用SDS-PAGE和WB法鉴定. 制备抗原,免疫新西兰兔子,得到抗血清并对抗血清进行鉴定.
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