【摘 要】
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为了建立人角膜内皮细胞系,本文以人角膜为材料对其角膜内皮细胞的体外培养及其细胞系建立进行了研究.从眼库获取人眼角膜片,采用内皮面朝下贴板培养和时间梯度连续贴膜法,筛
【机 构】
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中国海洋大学生命科学与技术学部海洋生命学院,青岛,266003
【出 处】
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国家“863”计划资源环境技术领域第三届海洋生物高技术论坛
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为了建立人角膜内皮细胞系,本文以人角膜为材料对其角膜内皮细胞的体外培养及其细胞系建立进行了研究.从眼库获取人眼角膜片,采用内皮面朝下贴板培养和时间梯度连续贴膜法,筛选出仅含有纯净角膜内皮细胞的培养孔,收集角膜内皮细胞悬浮于含有硫酸软骨素氧化降解物、牛眼生素、表皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、CEC液、羧甲基壳多糖、N-乙酰葡萄糖盐酸盐和氨基葡萄糖盐酸盐的DMEM-F12培养液(20﹪胎牛血清)中,置CO2培养箱中启动原代培养.待角膜内皮细胞长成单层后进行继代培养,目前的角膜内皮细胞已传至104代,命名为HCEC05tjf细胞系.HCEC05tjf细胞的特征性染色体数目为46条,但出现了染色体的非整倍性;其细胞的群体倍增时间约为26.2h.抗神经元特异性内酯酶(NSE)抗体的免疫细胞化学染色和形态回复实验的研究结果证实,该细胞系确为人角膜内皮细胞系.没有任何致瘤性的HCEC05tjf细胞系的建立,为人类人造角膜内皮的研制及其应用奠定了基础.
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