克氏原鳌虾亲环素基因cyclophilin A的生物学功能研究

来源 :2013年中国水产学会学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Linhan
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  [目的]克氏鳌虾CyclophilinA (CyPA)基因序列和功能到目前为止都是未知的,在本研究中,该基因的特性被分析.[方法]经克隆、测序后拼接,获得了克氏原螯虾的CYPA基因的全长cDNA序列,GenBank登录号为GU126426.应用荧光实时定量PCR分析该基因在克氏鳌虾不同组织中的转录情况,以pET30a(+)为载体构建重组表达质粒,并在大肠杆菌中表达,制备了多克隆抗体.利用Western blot检测克氏鳌虾不同组织中亲环素A的表达情况.[结果]PCR获得了CyPA编码基因的全长cDNA,其开放阅读框为495 bp.荧光实时定量PCR分析表明,该基因在心脏中的转录水平最高.Western blot 试验显示该蛋白在除了卵巢以外的其他组织中均有分布.[结论]成功获得克氏鳌虾CyPA基因的全长cDNA、CypA纯化蛋白及CypA多克隆抗体,初步了解了其在克氏鳌虾各组织中的分布情况,为进一步研究CypA在克氏鳌虾中的免疫机制奠定了基础.
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