c-Myc蛋白为转录调节因子,与生长分裂密切相关,因此在多种肿瘤细胞中的表达量较高。本研究期望得到高亲和力和高稳定性的纳米抗体,用于建立检测细胞内c-Myc蛋白表达情况的生物学检测方法。为了更好的适应复杂的胞内环境,获得更好的检测效果,本研究采用了纳米抗体与量子点检测技术相结合的实验方案。运用噬菌体展示技术,从羊驼免疫库中淘选能与c-Myc蛋白结合的纳米抗体,并将淘选获得的抗c-Myc纳米抗体在大肠杆菌中进行表达,获得的可溶性抗c-Myc纳米抗体经量子点标记后,用于检测细胞内c-Myc蛋白的表达情况,主要研究结果如下:1、通过四轮固相淘选,从羊驼c-Myc蛋白免疫文库中获得了11个与c-Myc蛋白特异性结合的纳米抗体序列并对这些序列的亲和力进行了比较分析,选出较好抗体序列。2、将选好的抗体序列转入表达载体p ET-25b(+)中,运用大肠杆菌表达系统诱导表达,获得可溶性的抗体蛋白,蛋白大小与预期相符,ELISA检测结果显示,亲和力正常。3、初步建立了量子点标记纳米抗体用于细胞内靶标检测的方法,具体操作如下:制备骨髓瘤细胞SP2/0细胞爬片,分别用不同量子点标记技术,检测c-Myc蛋白在细胞内表达情况,实验显示加入纳米抗体及量子点孵育并充分洗脱,细胞仍能捕捉到强烈荧光,单纯加入量子点,无荧光反应。实验结果与预期相符。