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背景与目的 鞘氨醇-1-磷酸(S1P)作为一种信号鞘磷脂,介导HDL诸多生物功能如抗动脉粥样硬化、抗血栓和保护血管内皮等.S1P通过其5个受体(S1PR1 ～ S1PR5)激活细胞内复杂的信号转导通路实现生物功能多样化.其中S1PR1/3在细胞增殖、血管发生和重建、神经形成、免疫细胞迁移、炎症反应、内皮细胞屏障功能等方面发挥重要作用.本研究主要探讨S1P通过S1PR1/3对THP-1源性巨噬细胞胆固醇流出的调控作用及其信号机制.方法 佛波酯(PMA)诱导THP-1单核细胞24 h后,选择不同时间和浓度的S1P进行处理,人胆固醇ELISA试剂盒检测细胞培养液中胆固醇含量.分别用VPC23019(S1PR1/3抑制剂,10 μmol/L)和JTE-013(S1 PR2抑制剂,10 μmol/L)孵育THP-1源性巨噬细胞12 h,然后加BODIPY-Cholesterol孵育过夜,激光共聚焦显微镜下观察胆固醇分布、定位和含量变化,同时用油红O染色显示细胞内脂质蓄积情况.VPC23019(10 μmol/L)处理THP-1源性巨噬细胞24 h后,Western blot检测PI3K-Akt信号分子以及NF-κB(p65)和LXR蛋白表达情况.以LY-294002(P13K抑制剂)和MK2206(Akt抑制剂)处理THP-1源性巨噬细胞24 h后,采用Western blot检测ABCA1的蛋白表达水平.结果 用1μmol/L S1P处理THP-1源性巨噬细胞24 h,培养液中胆固醇含量达到最高.THP-1源性巨噬细胞胆固醇大部分选择性定位于细胞膜上,S1P可降低THP-1源性巨噬细胞内胆固醇含量；与S1P对照组相比,VPC23019使THP-1源性巨噬细胞内胆固醇含量显著提高,调节胆固醇流出的关键蛋白ABCA1、ABCG1及其调控基因LXR的蛋白表达水平均明显降低,而NF-κB(p65)蛋白表达增加,同时S1PR1/3下游的信号分子PI3K和Akt的蛋白表达水平也显著下调,表明S1PR1/3对S1P介导的THP-1源性巨噬细胞胆固醇流出产生重要影响.与空白组相比,S1P能明显促进THP-1源性巨噬细胞内ABCA1和ABCG1蛋白表达,而S1PR1/3抑制剂、PI3K抑制剂和Akt抑制剂均能显著抑制S1P对ABCA1和ABCG1蛋白表达的促进作用,表明S1P通过S1PR1/3介导的THP-1源性巨噬细胞胆固醇流出与PI3K-Akt信号转导通路有关.结论 S1P促进THP-1源性巨噬细胞胆固醇流出；S1PR1/3参与S1P介导的胆固醇流出；S1P通过S1PR1/3介导的THP-1源性巨噬细胞内胆固醇流出与PI3K-Akt信号转导通路有关.