【摘 要】
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应用抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH)构建红笛鲷头肾消减cDNA文库,筛选红笛鲷免疫相关基因的EST.以哈氏弧菌(Vibrio harveyi)灭活疫苗体
【机 构】
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广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室,广东湛江524025
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应用抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH)构建红笛鲷头肾消减cDNA文库,筛选红笛鲷免疫相关基因的EST.以哈氏弧菌(Vibrio harveyi)灭活疫苗体内诱导红笛鲷(Lutjanus sanguineus)为实验组,以注射无菌生理盐水的红笛鲷为驱动组,通过SSH技术构建红笛鲷头肾消减cDNA文库.利用PCR技术和斑点杂交对文库进行筛选,从2424个含插入片段的阳性克隆中筛选了680个克隆在上海生工进行了序列测定.使用BLASTx和BLASTn工具对获得的ESTs与GenBank数据库进行同源性比较并根据相似性序列的名称通过GO法对ESTs进行注释.结果获得了30个与红笛鲷免疫防御相关基因的EST,如组织相容性抗原复合物基因(MHCⅠ和MJCⅡ)、免疫球蛋白基因(IgH和IgL)、热休克蛋白基因(HSP10、HSP70和HSP90)等.本研究成功构建了哈氏弧菌灭活疫苗免疫后与正常组织差异表达的消减cDNA文库,并获得一批与红笛鲷免疫防御相关的ESTs,为红笛鲷免疫相关基因的研究奠定基础.
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