论文部分内容阅读
背景 阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者睡眠时反复发生间歇低氧(IH)所致氧化应激损伤可引起内皮损伤和炎症反应,是导致心血管并发症的重要机制.硫氧还蛋白(TRX)可通过调节细胞因子活性、抗凋亡等途径在心血管系统损伤中发挥重要的保护作用.硫氧还蛋白结合蛋白(Txnip)是TRX的内源性抑制蛋白,可抑制TRX的抗氧化作用.雌激素可能通过影响TRX/Txnip抗氧化系统发挥作用,减少OSAHS相关的心血管等损伤.目的 通过建立IH人脐静脉内皮细胞(HUVECs)模型,研究雌激素TRX/Txnip通路对CIH所致的内皮细胞损伤的影响.方法 IH组HUVECs分别进行8h、16h和24h间歇低氧(1％O25min/21％O2 5min)处理,对照组(CON组)细胞则采用常氧处理24h,应用Annexin V-FITC检测细胞凋亡,确定最佳IH时间点.配制雌激素(E2)溶液(10-6～10-9mol/L),通过检测细胞凋亡,确定E2刺激浓度.Elisa法检测IL-6和TNF-α的浓度,生化方法检测MDA、SOD和GSH-PX水平,Realtime-PCR和Western blot方法检测TRX和Txnip的表达.采用siRNA沉默Txnip表达,检测细胞凋亡以及MDA、SOD和GSH-PX水平.结果 随着IH时间延长,HUVECs凋亡率增加,确认IH 16小时为观察时间点.IH+E2组的细胞凋亡率明显低于IH组(P＜0.01),随着雌激素浓度增高,细胞凋亡率下降(P＜0.01),雌激素为10-7mol/L时细胞凋亡率降到最低,确认10-7mol/L为雌激素刺激浓度.IH组的IL-6、TNF-α、MDA水平明显高于常氧组(P＜0.01),SOD和GSH-PX水平明显低于常氧组(P＜0.01).IH+E2组的IL-6、TNF-α、MDA水平低于IH组(P＜0.01),SOD和GSH-PX水平高于IH组(P＜0.05或P＜0.01).相对于IH组,IH+E2组的TRX表达升高,Txnip表达降低(P＜0.01).IH+Txnip沉默组的细胞凋亡率和MDA水平比IH组明显降低(P＜0.05或P＜0.01),SOD和GSH-PX水平反应升高(P＜0.05或P＜0.01).IH+Txnip沉默+E2组的细胞凋亡率低于IH+Txnip沉默组(P＜0.01),但MDA、GOD和GSH-PX水平与IH+Txnip沉默组无明显差异(P＞0.05).结论 TRX可能在IH诱导HUVECs的损伤中发挥保护作用,Txnip具有促凋亡作用,雌激素可能通过促进血管壁TRX蛋白以及抑制Txnip蛋白表达而发挥降低氧化应激损伤的作用,雌激素的保护作用可能存在Txnip以外的机制.