【摘 要】
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正常的细胞代谢以及外源的化学物质都能够造成DNA的氧化损伤,快速灵敏的DNA氧化损伤的检测方法的建立是十分必要的。本文中利用高效、快速的毛细管电泳-激光诱导荧光技术
【机 构】
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中国科学院生态环境研究中心环境化学与生态毒理学国家重点实验室,北京,100085
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正常的细胞代谢以及外源的化学物质都能够造成DNA的氧化损伤,快速灵敏的DNA氧化损伤的检测方法的建立是十分必要的。本文中利用高效、快速的毛细管电泳-激光诱导荧光技术结合高荧光强度的量子点建立了一种DNA氧化损伤的检测方法。我们将Fenton反应产生的DNA氧化损伤产物经过四步处理：首先利用DNA修复酶Fpg将受损的碱基切除,同时将受损碱基两侧的磷酸二酯键切断,得到5和3都是磷酸化的核苷酸空位,然后利用碱性磷酸酶将5和3的磷酸化去掉,接下来DNA聚合酶在核苷酸空位处添加biotin-dd NTP,然后streptavidin-QD与biotin标记的DNA序列结合,最后利用毛细管电泳-激光诱导荧光检测。由于DNA带负电,QD不带电,根据末端标记的自由溶液原理(ELFES)1,DNA-biotin-streptavidin-QD复合物的荷质比不同于QD-streptavidin单独的,从而在毛细管电泳中得到分离。该检测5h之内可完成,利用特异性的DNA修复酶能够检测特定的DNA损伤。
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