耐酸性是口腔致龋菌的最重要致龋特征,是低pH生物膜环境中细菌生存并持续产酸致龋的前提条件。F-ATPase是致龋菌耐酸性的决定因素,是变异链球菌(变链菌)等致龋菌最重要的耐酸毒力因子,至今未见有生物膜环境中观察致龋菌F-ATPase的表达特点的相关研究。目的:以变链菌为代表,构建F-ATPase操纵元启动子启动的绿色荧光蛋白穿梭表达载体,为研究致龋菌耐酸因子的表达和调控机制提供物质条件和基础。方法::于变链菌UA159中扩增获得F-ATPase启动子并测序验证后插入到绿色荧光蛋白表达载体(pEGFP-N1),构建荧光蛋白表达载体(pFgfp);分离pFgfp中目的片段连接至pDL276多克隆位点,构建穿梭表达载体pLFgfp并转化至变链菌。结果:对插入T载体的片段测序与变链菌基因组进行对比,证实为F-ATPase操纵元启动子序列;重组载体pFgfp转化大肠杆菌后菌落具有绿色荧光,菌落PCR鉴定原核表达载体pFgfp正确;重组载体(pLFgfp)转化到DH5α中,菌落具有绿色荧光,荧光菌落质粒抽提、酶切、电泳均证实插入片段与目的片段一致,表明pLFgfp构建成功。转化有穿梭表达载体的变链菌能在含有kan+的BHI培养基上生长,证实菌体荧光,表明重组载体可于变链菌内表达。结论:本实验成功构建由F-ATPase启动子启动的荧光蛋白穿梭表达载体,通过转化鉴定,穿梭表达载体均能在变链菌中表达并随变链菌的扩增而扩增。