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目的:延迟整流钾离子通道(如IKr和IKs)同一通道的不同亚基与不同通道间均存在相互作用。通过研究IKs通道内部亚基间不同比例组合的相互作用,比较KCNQ1/KCNE1电流与野生型的IKs电流的电生理特性.对比共转染的KCNQ1/KCNH2通道与野生型通道的电流特征,以进一步揭示心律失常的发病基础,为其临床用药提供理论依据.从以下两个部分进行论述。
第一部分:磁珠标记法测定共转染后ICCNQl/ICCNEl通道电流。
方法:利用免疫磁珠阳性标记法制作KCNQ1/KCNE1通道表达系统,测定通道电流的I-V曲线等,比较其与WT-KCNQ1通道电流的区别,探讨KCNQ1/KCNE1通道亚基间不同比例组合时的电流特性。结果:记录KCNQ1/KCNE1通道电流密度,在亚基间比例达到1:3时达到高峰;稳态激活曲线的V1/2及k均比野生型通道大;灭活时间常数均较大,灭火时间长;KCNQ1/KCNE1通道的激活时间常数随着电压的增加而不断增大。结论:1.所记录的KCNQ1/KCNE1通道电流密度比较大,说明KCNE1通道蛋白的表达量与IKs电流密度成正比。2. KCNQ1/KCNE1通道门控动力学特性与WT-KCNQ1通道完全相反,却与经典的Iks。电流一致,即表现出慢激活、慢灭火和基本上无失火的电流特征。3.电流密度和门控动力学的改变与KCNQ1/KCNE1通道内部亚基间相互作用密不可分。
第二部分:WT-KCNQ1/KCNH2通道的电生理特征的研究及比较。
方法:利用免疫磁珠阳性标记表达系统记录WT-KCNQ1/KCNH2通道电流,分别比较其与WT-KCNQ1通道及WT-KCNH2通道电流的区别,揭示不同延迟整流钾通道间的相互作用,及与心律失常的发生机制相关。结果:KCNQ1/KCNH2通道在KCNQ1通道蛋白的作用下电流密度均明显增加,且在刺激电压20mV以上时出现明显的内向整流特性;稳态激活曲线与波尔兹曼方程拟合效果良好;在20mV时激活时间常数Tau值开始迅速下降,这与其峰值电流的I-V曲线相吻合。结论:1.共转染的钾通道的电流密度比野生型的大,但未改变其内向整流特性。说明KCNQ1通道蛋白的协同作用,能明显改变KCNH2通道电流的曲线形状和峰值。2.共转染的钾通道的灭火时间常数和激活时间常数明显比单独的野生型通道大。3.共转染后通道的动力学改变说明钾通道的不同通道间电流存在相互作用、相互影响。