【摘 要】
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目的 体外培养骨髓脂肪祖细胞(BMAPs),比较其与骨髓间充质干细胞(BMSCs)在形态、表型特征、成脂肪分化能力以及脂肪分化相关基因表达方面的差别.方法 确无菌取1～2月龄雄性SD大鼠的股骨和胫骨骨髓制作细胞悬液,EBM-2(含20％FBS、15μg/ml ECGs)培养基差速贴壁法培养第三次贴壁细胞,取3到5代细胞用于实验.流式细胞分析检测CD34、CD44、CD45以及CD90表达；STEM
【机 构】
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650032昆明,成都军区昆明总医院细胞生物治疗中心,干细胞与免疫细胞生物医药技术国家地方联合实验室,云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室
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目的 体外培养骨髓脂肪祖细胞(BMAPs),比较其与骨髓间充质干细胞(BMSCs)在形态、表型特征、成脂肪分化能力以及脂肪分化相关基因表达方面的差别.方法 确无菌取1～2月龄雄性SD大鼠的股骨和胫骨骨髓制作细胞悬液,EBM-2(含20％FBS、15μg/ml ECGs)培养基差速贴壁法培养第三次贴壁细胞,取3到5代细胞用于实验.流式细胞分析检测CD34、CD44、CD45以及CD90表达；STEMPRO(R) Adipogenesis Differentiation Kit检测细胞成脂肪分化能力；实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time qPCR)检测过氧化物酶体增殖激活受体γ(Ppaγ),脂肪酸结合蛋白4(Fabp4),脂蛋白脂肪酶(Lpl),CCAAT/增强子结合蛋白α(Cebpa),葡萄糖转运蛋白4(Slc2a4)以及前脂肪细胞因子1 (pread1) mRNA表达.结果 传代接种培养24h,BMSCs形态上呈宽大、扁平状,而BMAPs大部呈长三角状,接种48h后BMSCs排列更为有序,而BMAPs多交织成网状.BMAP表达CD34、CD44、CD45以及CD90,BMSC表达CD44以及CD90,未检测到CD34和CD45表达.诱导培养后第4天,BMAPs成脂率显著高于BMSCs组(P＜0.01),到第8天,BMAPs成脂率为(87.2±11.67)％),BMSCs组成脂率为(18.5±10.2)％,相差更为显著(P＜0.01).诱导分化后第4、8天,Cebpa、Fabp4、Lp1、Ppaγ和Slc2a4 mRNA在BMAPs表达均显著高于BMSCs (P＜0.01).结论 本次实验获得养的1种具有干细胞的生物学特性,同时也高表达脂肪分化相关的特异性基因,可以高效均质性地分化为脂肪细胞的BMAPs.
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