【摘 要】
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目的：构建SFN真核表达载体pcDNA3.1-SFN,并在PK-15细胞中表达,研究其对细胞增殖的作用.方法：从PK-15细胞中提取总RNA,应用RT-PCR法反转录合成cDNA,设计引物,扩增目的片段,与pcD
【机 构】
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华中农业大学动物医学院,武汉43007
【出 处】
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第14届全国规模化猪场主要疫病监控与净化专题研讨会
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目的：构建SFN真核表达载体pcDNA3.1-SFN,并在PK-15细胞中表达,研究其对细胞增殖的作用.方法：从PK-15细胞中提取总RNA,应用RT-PCR法反转录合成cDNA,设计引物,扩增目的片段,与pcDNA3.1载体连接后转化大肠杆菌DH5 α,TSA平板筛选阳性克隆,提取质粒,阳性克隆经双酶切、测序验证.用阳离子脂质体法将SFN基因转染PK-15细胞,并用间接免疫荧光法及蛋白免疫印迹检测重组质粒的表达.流式细胞仪检测目的基因对细胞周期的影响.结果：成功构建真核表达载体pcDNA3.1-SFN;转染后的细胞成功超表达SFN基因.转染24h后,该基因能引起细胞G1期缩短,S期延长,造成细胞周期的阻滞.结论：该研究顺利表达真核载体pcDNA3.1-SFN,转染到猪肾细胞中能有效提高mRNA的表达水平,为进一步研究PCV2在猪肾细胞中的增殖模式奠定了基础.
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