【摘 要】
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类泛素化(Small ubiquitin-related modifier,SUMO)是蛋白翻译后修饰的重要形式之一, E2结合酶UBC9在蛋白类泛素化过程中起到重要枢纽作用.本文主要目的为研究草鱼UBC9(Grass carp ubiquitin-conjugating enzyme,GcUBC9)蛋白的原核表达和建立UBC9的纯化方法.首先克隆基因GcUBC9的cDNA全长,得到477 bp的
【机 构】
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国家水生动物病原库,农业部淡水种质资源重点实验室, 上海海洋大学水产与生命学院,上海,201306
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类泛素化(Small ubiquitin-related modifier,SUMO)是蛋白翻译后修饰的重要形式之一, E2结合酶UBC9在蛋白类泛素化过程中起到重要枢纽作用.本文主要目的为研究草鱼UBC9(Grass carp ubiquitin-conjugating enzyme,GcUBC9)蛋白的原核表达和建立UBC9的纯化方法.首先克隆基因GcUBC9的cDNA全长,得到477 bp的开放阅读框(Open reading frame,ORF),其编码158个氨基酸,对其同源性分析发现其与斑马鱼的亲缘关系最近；构建原核表达载体pGEX-4T-3-GcUBC9,诱导表达谷胱甘肽转移酶(GST)与GcUBC9的融合蛋白GST-GcUBC9,分析其表达及其可溶性；纯化方法选用AKTAprime Plus标签蛋白纯化系统和基于GST标签亲和层析实验室普通方法；用纯化的融合蛋白GST-GcUBC9制备鼠源多克隆抗体.结果 表明,融合蛋白GST-GcUBC9成功表达,可溶；纯化蛋白纯度较高,两种方法蛋白得率比为7.8；成功制备高效价鼠源多克隆抗体.
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