【摘 要】
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目的:探究2型糖尿病环境下,SIRT6与BMAL1基因表达对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化能力的影响。方法:构建自发性2型糖尿病(GK)大鼠模型。体外分离纯化培养GK大鼠及对照组Wi
【机 构】
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中国人民解放军总医院第一医学中心口腔科;
【基金项目】
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国家自然科学资金面上项目81470754~~
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目的:探究2型糖尿病环境下,SIRT6与BMAL1基因表达对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化能力的影响。方法:构建自发性2型糖尿病(GK)大鼠模型。体外分离纯化培养GK大鼠及对照组Wistar(WT)大鼠的BMSCs。对实验组GK-BMSCs组及对照组WT-BMSCs组进行成骨诱导7天。采用碱性磷酸酶(ALP)染色对成骨分化能力进行定性比较,实时荧光定量聚合酶链式反应(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)检测细胞成骨前后SIRT6、BMAL1、RUNX2、OCN基因的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测SIRT6、BMAL1、RUNX2、OCN蛋白的表达。结果:成骨诱导7天后,碱性磷酸酶(ALP)染色,WT组蓝染面积及程度明显大于GK组。成骨诱导后,GK组及WT组中SIRT6和BMAL1 mRNA的相对表达量均较诱导前明显升高(P<0.01);但是成骨诱导前后,GK组SIRT6和BMAL1 mRNA的表达量均低于WT组。在成骨诱导前,qRT-PCR检测GK组及WT组的RUNX2、OCN两种基因种成骨基因均少量表达,组间无显著差异;成骨诱导后,GK组及WT组中RUNX2、OCN两种基因均较诱导前显著增高(P<0.01),但GK组上述基因的表达显著低于WT组。Western blot检测GK组及WT组总蛋白同样支持上述结果。结论:2型糖尿病环境下,BMAL1受上游基因SIRT6正向调控,SIRT6与BMAL1基因表达下降,进而降低BMSCs成骨分化能力。
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