【摘 要】
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目前,SRAP标记技术在芦笋(Asparagus officinalisL)上还没有相关的研究报道.本研究以芦笋基因组总DNA为模板,对芦笋SRAP反应体系的重要参数进行优化试验,建立了一套适用于芦
【机 构】
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江西省农业科学院生物工程中心,南昌,330200
【出 处】
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中国园艺学会芦笋分会第一届会员大会暨第四届中国芦笋发展与战略研讨会
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目前,SRAP标记技术在芦笋(Asparagus officinalisL)上还没有相关的研究报道.本研究以芦笋基因组总DNA为模板,对芦笋SRAP反应体系的重要参数进行优化试验,建立了一套适用于芦笋稳定可靠、重复性强的SRAP反应体系:25μL的反应体系中,模板DNA量80ng、Mg2浓度3.0mmol/L、上下游引物各0.2 μmol/L、dNTPs0.3mmol/L、Taq DNA聚合酶1U以及1×Buffer.扩增程序为:94℃预变性3min,反应前5个循环在94℃ 30s、35℃30s、72℃1.5min的条件下运行;随后的35个循环退火温度提高到50℃;最后72℃延伸10min.并比较了琼脂糖凝胶和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测SRAP扩增产物多态性的差异,结果发现:6％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测扩增产物比琼脂糖的效果好.然后,利用该优化体系对引物进行了全面筛选,从总共的256个SRAP引物组合中筛选出扩增条带清晰丰富、重复性好的引物组合239个,同时也证明了该体系是稳定可靠的.该优化体系的建立及其引物的筛选为今后利用SRAP标记技术进行芦笋种质资源遗传多样性、图谱构建、基因定位与辅助育种等研究奠定了技术基础.
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