奶牛成骨细胞的体外培养及鉴定

来源 :中国畜牧兽医学会2008年学术年会暨第一届中国兽医临床大会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:rsbgrc
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取新生奶牛肋骨,剪成lmm3大小骨片,胰蛋白酶消化5次,D-Hanks彻底冲洗后,骨片置于含15%FBS的DMEM中培养,获取单层细胞。倒置显微镜下观察细胞形态,改良钙-钴法染色碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP),比色法检测ALP活性,RT-PCR检测骨钙素(osteocalcin,OC) mRNA,放射免疫法检测骨钙素蛋白及茜素红染色观察细胞钙化结节,对所获得细胞进行鉴定。结果显示,采用本法所获得的细胞具有典型的成骨细胞形态和特性:钙-钴法染色ALP呈阳性:培养7d后可检测到OC mRNA表达,12d后细胞上清液中可检测到OC蛋白;诱导培养2w细胞基质可见钙化结节形成。提示采用胰蛋白酶消化,组织块移行法所培养的细胞具有成骨细胞特性,本方法可获得高纯度、高活性的奶牛成骨细胞。
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