目的利用改良的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶测定试剂盒（定量比值法）检测斑马鱼不同组织、不同时相胚胎的G6PD酶活性。利用基因重组等技术构建g6pd-pCS²⁺、mutant g6pd-pCS²⁺、g6pd-EGFP-pCS²⁺、mutant g6pd-EGFP-pCS²⁺。同时利用原位杂交技术观察斑马鱼g6pd的表达情况,从而为构建G6PD缺乏症的斑马鱼疾病模型奠定基础。方法 1.运用改良的G6PD定量比值法检测成年斑马鱼各组织,以及不同时相的胚胎G6PD酶活性,并利用RT-PCR检测mRNA水平上表达情况;2.（1）提取斑马鱼Total RNA,制备斑马鱼cDNA,通过RT-PCR克隆得到斑马鱼g6pd基因片段全长;（2）g6pd-pCS²⁺重组质粒的构建,并且制备地高辛标记的反义mRNA探针,在野生型斑马鱼Tuebingen进行原位杂交,观察g6pd基因的表达情况;（3）g6pd-pCS²⁺重组质粒鉴定正确后,运用重叠延伸定点诱变原理设计出突变型mutant g6pd基因,将mutant g6pd基因与EGFP-pCS²⁺质粒重组构建突变型mutant g6pd-EGFP-pCS²⁺重组质粒,然后利用显微注射技术将mutant g6pd-EGFP-pCS²⁺重组质粒注入斑马鱼胚胎中,观察荧光表达。结果 1.野生型成年斑马鱼各组织G6PD酶活性结果为:脑1.7307±0.1673,眼睛1.7085±0.2230,鱼鳃1.7347±0.1901,肠1.7501±0.2241,肌肉1.7201±0.1573,皮肤1.7460±0.1756,血1.7012±0.1902。各时相的酶活性为:24小时1.7429±0.1701,48小时1.7495±0.1296,5天1.7118±0.2236,15天1.7621±0.1690。2.成功设计g6pd基因、突变体mutant g6pd基因;3.成功构建突变型mutant g6pd-EGFP-pCS²⁺重组质粒;4.成功制备出斑马鱼g6pd基因反义mRNA探针;5.成功的将mutant g6pd-EGFP-pCS²⁺重组质粒显微注射入斑马鱼胚胎内,在荧光显微镜下观察到荧光表达情况。结论在野生型斑马鱼中各个组织及各个时相胚胎的g6pd恒定表达,差异无统计学意义;本研究首次采用新型模式生物斑马鱼通过原位杂交观察g6pd基因在野生型斑马鱼胚胎不同发育时相中的表达情况,并人工设计mutant g6pd基因,运用基因重组原理成功构建出突变型的mutant g6pd-EGFP-pCS²⁺重组质粒,通过显微注射的方法注入斑马鱼胚胎内,为共注射GATA-1-mutant g6pd-EGFP-PBSK Isce I重组质粒和IsceI酶,然后利用显性负效应制备斑马鱼G6PD缺乏症模型奠定基础,为进一步的研究人类G6PD缺乏症提供了新的途径和方法 。