NOD2在小鼠侵袭性肺曲菌病时的表达及小鼠巨噬细胞抗曲菌免疫中的作用

来源 :第六届全国呼吸道感染学术大会暨全国抗感染药物临床评价高峰论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:w313296304
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目的:了解NOD2在免疫受损小鼠患侵袭性肺曲菌病时肺组织中表达的改变,并进一步研究其在小鼠巨噬细胞RAW264.7抗曲菌免疫中的作用。 方法:(1)采用环磷酰胺腹腔注射的方法造成小鼠粒缺,经鼻滴入烟曲菌孢子,建立小鼠侵袭性肺曲菌病模型,检测感染前后肺组织中NOD2和RIP2基因表达情况;(2)合成针对小鼠NOD2的三条siRNA序列及阴性对照序列,转染RAW264.7细胞,通过实时荧光PCR方法及westem blot方法检测基因沉默效果,筛选出有效序列;(3)以筛选出的有效siRNA序列转染RAW264.7细胞,设置正常细胞做对照,分别以底液、MDP、Af、MDP+Af刺激两组细胞,并观察24h、48h、72h,收集细胞和上清,检测NOD2和RIP2基因和蛋白的表达情况、NF-κB蛋白表达情况和TNF-α、IL-8的变化。 结论:小鼠患侵袭性肺曲菌病后肺组织中NOD2和RIP2 mRNA升高,RAW264.7细胞经MDP、曲菌孢子或MDP+曲菌孢子刺激后,其NOD2 mRNA和蛋白表达、RIP2 mRNA和蛋白表达、NF-κB表达、TNF-α、IL-8均显著升高,针对NOD2的RNA干扰可以明显抑制以上反应。提示NOD2在小鼠体内和小鼠RAW264.7细胞抗曲菌免疫反应中扮演重要角色,作用机制可能与RIP2依赖的NF-κB信号通道激活有关。
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