葡萄卷叶病毒-3 外壳蛋白基因原核表达及抗血清制备

来源 :国家农药创制工程技术研究中心2007学术研讨会暨第四届湖南省湖北省农药植保学术交流会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tongchenggouwu
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利用RT-PCR 技术扩增得到葡萄卷叶病毒-3(Grapevine leafroll associated virus-3, GLRaV-3)中国分离株的外壳蛋白(Coat protein, CP)基因。将此基因克隆到载体pET-28a(+)上,酶切鉴定后进行测序。序列分析结果表明,克隆得到的cp 包含942bp,与已报道的其它 GLRaV-3 分离物的cp 核苷酸同源性为93%~95%,氨基酸同源性为95~99%。将获得的重组子pET-cp 转化大肠杆菌BL-21 (DE3 plysS)后用终浓度为1mmol L-1 的IPTG 进行诱导表达, SDS-PAGE 及Western blotting 分析表明,cp 在大肠杆菌中正确表达,目标蛋白分子量约为35kDa,纯化表达产物后免疫家兔制备抗血清。A 蛋白酶联免疫吸附测定(Protein A sandwich- enzyme-linked immunosorbent assay,PAS–ELISA)及斑点免疫结合测定(Dot-blot immunobinding assay,DBIA)结果显示,获得的抗血清可用于检测感病葡萄样品中的GLRaV-3。
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