【摘 要】
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为获得并研究鸭干扰素-α(DuIFN-α)的生物学功能,将鸭干扰素-α(DuIFN-α)成熟蛋白基因与原核表达载体pET32a+连接后转化到BL21(DE3)获得工程菌BL21(DE3)/pET32a+-DuIFN-α,
【机 构】
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四川农业大学动物医学学院禽病防治研究中心,四川雅安 625014
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛
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为获得并研究鸭干扰素-α(DuIFN-α)的生物学功能,将鸭干扰素-α(DuIFN-α)成熟蛋白基因与原核表达载体pET32a+连接后转化到BL21(DE3)获得工程菌BL21(DE3)/pET32a+-DuIFN-α,对其诱导表达条件、表达产物的纯化和复性关键技术及其抗水疱性口炎病毒(VSV)活性、保存温度对工程菌稳定性的影响进行了研究。结果表明:BL21(DE3)/pET32a+-DuIFN-α经0.4mmol/L IPTG诱导获得高效表达,表达的重组蛋白分子量大小约37KD,以包涵体形式存在；重组蛋白经镍金属螯合介质(Ni-MIAC)进行纯化和复性后获得理想效果,其抗VSV活性的比活力达到12800U/mg;15U/ml的鸭干扰素-α鸭瘟强毒可以表现出抑制作用；工程菌种的表达能力在4℃和-20℃分别保存40d和90d即逐渐丧失,-70℃保存1年仍能够获得稳定表达。本复性方法成功的实现了鸭干扰素-α的柱上层析复性,表现出了对VSV和DPV强毒的抗病毒活性,为鸭干扰素-α的临床应用提供了试验数据。
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