【摘 要】
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目的 Notch1胞内段荧光表达载体的构建及鉴定.方法 提取人高分化鼻咽癌细胞CNE1株的RNA；通过RT-PCR获得Notch1胞内段(NIC)的编码序列,通过基因重组技术将其插入到pEGFP-N1中；利用酶切和测序确定重组质粒pEGFP-N1-NIC的正确性；采用脂质体介导的方法将重组质粒转染到人低分化鼻咽癌细胞CNE2中,通过荧光显微镜观察、RT-PCR和Western blot的方法检测绿
【机 构】
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北京大学深圳医院中心实验室 518036
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目的 Notch1胞内段荧光表达载体的构建及鉴定.方法 提取人高分化鼻咽癌细胞CNE1株的RNA；通过RT-PCR获得Notch1胞内段(NIC)的编码序列,通过基因重组技术将其插入到pEGFP-N1中；利用酶切和测序确定重组质粒pEGFP-N1-NIC的正确性；采用脂质体介导的方法将重组质粒转染到人低分化鼻咽癌细胞CNE2中,通过荧光显微镜观察、RT-PCR和Western blot的方法检测绿色荧光和NIC的表达情况.结果 通过RT-PCR的方法从CNE1细胞中得到一个2424 bp的特异性扩增产物；酶切和基因测序结果表明重组质粒pEGFP-N1-NIC中所插入片段与设计相符；转染CNE2细胞48 h后,荧光显微镜镜检发现转染后的细胞绿色荧光表达,RT-PCR和Western blot的结果显示转染后的CNE2细胞能够高表达NIC.结论 Notch1胞内段荧光表达载体得到正确构建,并且能够在鼻咽癌细胞株中高效表达.
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