【摘 要】
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目的：探讨K562细胞系中BCR/ABL融合基因对抑癌基因PTEN及其介导的信号传导通路的调控机制.方法：用不同浓度的格列卫干预K562细胞不同时间后,通过荧光定量PCR检测BCR/ABL、PTEN、mTOR、FAK mRNA水平变化及相互关系,Western blotting检测Akt和p-Akt水平,分析BCR/ABL融合基因对PTEN mRNA表达的影响以及对PI3K/Akt、mTOR、FA
【机 构】
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河北医科大学第二医院血液内科,河北石家庄050000;保定市第一医院血液肿瘤内科,河北保定071000
【出 处】
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河北省医学会第五届第二次血液学年会暨河北省医师协会血液科医师分会第一届第二次大会
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目的：探讨K562细胞系中BCR/ABL融合基因对抑癌基因PTEN及其介导的信号传导通路的调控机制.方法：用不同浓度的格列卫干预K562细胞不同时间后,通过荧光定量PCR检测BCR/ABL、PTEN、mTOR、FAK mRNA水平变化及相互关系,Western blotting检测Akt和p-Akt水平,分析BCR/ABL融合基因对PTEN mRNA表达的影响以及对PI3K/Akt、mTOR、FAK信号通路的相互关系.结果：1细胞形态学改变我们选用1μg/mL的格列卫干预K562细胞36h,观察干预组及未干预组细胞形态变化,用正常对照组细胞呈圆形或椭圆形,体积较大,染色质疏松.格列卫干预后48h,部分细胞体积缩小,染色质高度浓缩边集,核碎裂、溶解2格列卫抑制K562细胞生长曲线选取对数生长期K562细胞,加入终浓度分别为：0.5、1、2、5、10μg/mL的格列卫干预不同时间的K562细胞后,观察加药后14天对K562细胞增殖抑制的影响绘制细胞生长曲线(图2).结果显示格列卫呈时间、剂量依赖性的抑制K562细胞增殖.3格列卫抑制K562细胞BCR/ABL融合基因后对PTEN、mTOR、FAK、pAkt影响.我们选用上述不同浓度干预后发现0.5μg/mL对细胞抑制效果不明显,2μg/mL以上浓度对细胞抑制明显,细胞短时间内死亡明显,而1μg/mL格列卫干预效果较好接近72h的IC50浓度,故做为试验浓度,分别观察加药后12h,24h,36h,48h,72h BCR/ABL融合基因后对PTEN、mTOR、FAK、pAkt影响(图3,图4). BCR/ABL融合基因mRNA水平随着时间延长,表达水平由最初(2.204±0.302)逐渐降低,36h达最低(0.555±0.077),72h后回升(1.081±0.211).PTEN mRNA表达水平由最初(0.365±0.038)逐渐升高,36h达高峰(2.274±0.261),随后又逐渐降低至72h (0.266±0.043).格列卫抑制BCR/ABL融合基因后p-Akt水平持续降低,由最初的(0.896倍/总Akt)降至72h(0.218倍/总Akt).mTOR mRNA表达水平由最初(0.286±0.031)逐渐降低至36h最低值(0.042±0.008),后逐渐回升至72h (0.363±0.025).FAK mRNA表达水平先降低后升高,由最初(0.582±0.043)逐渐降低,在36h达最低值(0.379±0.028),72h后恢复为(0.550±0.041)结果显示上述信号分子,除p-Akt持续降低,BCR/ABL融合基因最低值在48h以外,其它信号分子峰值或低谷均出现在36h,72h后随着BCR/ABL融合基因的恢复而均出现不同程度的恢复.相关性分析显示：BCR/ABL与p-Akt正相关,相关系数(r=0.879,P＜0.05)；与PTEN负相关相关系数(r=-0.881,P＜0.05),BCR/ABL与mTOR正相关,相关系数(0.961,P＜0.05)； PTEN与FAK负相关,相关系数(r=-0.995,P＜0.05)结论：BCR/ABL融合基因可以通过抑制PTEN基因表达,进而调控PI3K/Akt、mTOR、FAK信号传导通路,参与细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移、细胞周期调控等生物学特性.
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