【摘 要】
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本文经RT-PCR扩增了禽流感病毒A/PFV/Restock/1/34(H7N1)1.7kbHA基因的eDNA,将其克隆到pMD18-T中并测序.在去除编码HA信号肽的核苷酸序列后,亚克隆到杆状病毒转移载体pBlueBacHis,筛选到重组转移载体命名为pBHisH7HA,测序正确后与线性化的杆状病毒DNA(Bac-N-BlueTMDNA)共转染Sf9昆虫细胞,挑取蓝色蚀斑,经三轮蚀斑纯化,获得数
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,哈尔滨,150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,哈尔滨,15
【出 处】
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中国畜牧兽医学会禽病学分会禽流感及免疫抑制病论坛
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本文经RT-PCR扩增了禽流感病毒A/PFV/Restock/1/34(H7N1)1.7kbHA基因的eDNA,将其克隆到pMD18-T中并测序.在去除编码HA信号肽的核苷酸序列后,亚克隆到杆状病毒转移载体pBlueBacHis,筛选到重组转移载体命名为pBHisH7HA,测序正确后与线性化的杆状病毒DNA(Bac-N-BlueTMDNA)共转染Sf9昆虫细胞,挑取蓝色蚀斑,经三轮蚀斑纯化,获得数株重组杆状病毒rpBlueHisH7HA.提取重组病毒DNA经PCR证明目的基因片段已插入到杆状病毒基因组中,血凝实验,SDS-PAGE和Western-blot实验结果表明HA基因在重组杆状病毒感染的HFive细胞中获得了表达.
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