【摘 要】
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目的：构建GRα-GST融合蛋白,以期为筛选类糖皮质激素样中药提供工具。方法：运用RT-PCR扩增得到包含CDS的GRα基因序列后,经T-A克隆插入PMD-18载体。以此重组载体为模板扩增
【机 构】
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浙江中医药大学,浙江杭州310053
【出 处】
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中华中医药学会第十六届全国风湿病学术大会
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目的：构建GRα-GST融合蛋白,以期为筛选类糖皮质激素样中药提供工具。方法：运用RT-PCR扩增得到包含CDS的GRα基因序列后,经T-A克隆插入PMD-18载体。以此重组载体为模板扩增含有BamHⅠ与XhoⅠ酶切位点的GRαORF,插入pGEX-4T-1载体后形成了重组载体,并使其在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导表达融合蛋白,再用SIDS-PAGE检测融合蛋白的表达。结果：成功的将CRα-全基因构建入原校表达载体pGEX-4T-1中。测序结果表明载体构建成功,无插入和移码突变。经IPTG诱导后获得与预测大小(112kDa)完全一致的目的蛋白即GRa-GST融合蛋白。结论：成功获得了重组质粒并在大肠杆菌中较好的诱导表达得到了GRα-GST融合蛋白。
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