目的 建立对肝豆状核变性进行分子诊断新方法,并应用在临床上。方法 先循基因组途径,采用PCR-RFLP分析方法,检测中国人第一热点(R778L)及第二热点(T935M)突变。对无第一、二热点突变的,采用长链RT-PCR技术,从外周血提取总RNA并合成cDNA,以cDNA为模板,分7个片段扩增致病基因编码区,将纯化后的PCR产物直接测序,找出基因突变的位点。同时应用限制性酶切分析(或基因组DNA PCR产物直接测序的方法)以证实所发现的突变。 结果 在14个家系中发现13个家系存在WD基因突变。其中5个家系的患者存在第8外显子基因突变；2个家系的患者存在第12外显子的基因突变；2个家系的患者存在第13外显子的基因突变；1个家系的患者存在第16外显子的基因突变；3个家系的患者存在第2外显子的基因突变。另1个家系的患者未找到突变。结论 在本研究中,建立了一套WD的新的分子诊断方法,其中本研究将长链RT-PCR技术应用于WD的分子诊断从而有效克服常规RT-PCR存在的缺点。从本实验研究看长链RT-PCR技术不仅确实为一种新的快速可靠的实验方法,同时为发现新的WD基因的突变提供了一种新的方法。