Renin Receptor在大肠杆菌中的表达、复性并同时纯化

来源 :第三届中国中西部地区色谱学术交流会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wuchianren
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:重组的肾素受体(RnR)在E coli中表达易形成难溶于水的包涵体,必须进行蛋白复性才能获得有生物活性的目标蛋白。 方法:通过对诱导时间的考察,优化了RnR在摇瓶中的发酵培养条件,并采用疏水型色谱饼对RnR进行复性并同时纯化。 结果:在优化条件下,RnR在E coli中的表达量可达34.8%。将RnR包涵体分别用8.0 mol/L脲和7.0 mol/L盐酸胍(GuaHCl)提取,用疏水型色谱饼对其进行复性并同时纯化,结果表明前者可得到两个目标蛋白色谱峰,质量回收率分别为30.2%和62.4%,而后者仅得到一个目标蛋白峰,质量回收率为36.3%。 结论:采用疏水色谱饼解决了由于RnR疏水强易形成聚集沉淀的难题,可在30min内对RnR完成分离纯化的同时进行复性,建立了重组RnR复性并同时纯化新工艺。
其他文献
目的:建立一种以以叔丁基-冠-4-杯[4]芳烃键合固定相分离苯二胺的方法。方法:合成1,2-杯[4]芳烃冠-4,采用KH-560做为偶联剂,将其与硅胶键合,得到1,2-杯[4]芳烃冠-4键合硅胶固定相(CBS4-4)。分离条件为(甲醇):水(30:70,体积比),流速0.8 mL/min,检测波长254nm,柱温30℃。结果:结果成功的实现了三种苯二胺位置异构体的分离。结论:该方法可良好实现对苯二
目的:建立离子色谱法检测催化反应母液中及经过吸收处理后的母液中各种阴离子的含量。方法:以12 mmol/L Na2CO3为淋洗液,色谱柱为阴离子柱,检测器为电导检测器,抑制器电流60mA。运用所建立的方法进行测定,对母液中所含有的乙酸根、一氯乙酸根、氯离子、硫酸根及亚硫酸根作混标,并作出各自的标准曲线。结果:测定出母液及其处理液中各阴离子的含量。结论:该方法对氯乙酸的生产控制具有重要意义。
目的:建立一种以对叔丁基-冠-4-杯[4]芳烃键合固定相对多环芳烃的分离的方法。方法:制备了对叔丁基-冠-4-杯[4]芳烃键合固定相,研究了7种多环芳烃在该键合固定相上的分离行为,并在相同的条件下,与多环芳烃在Agilem Eclipse XDBC18柱的分离行为进行了比较。结果:7种多环芳烃在该键合固定相上可以良好的进行分离。结论:固定相分离多环芳烃有独特的优势,有利于实现快速分析,节省溶剂,降
目的:建立一种四氮杂杯[2]芳烃[2]三嗪固定相分离对多环芳烃的方法。方法:选用氨丙基三乙氧基硅烷作为硅烷化试剂,制备了四氮杂杯[2]芳烃[2]三嗪键合硅胶整体柱(TNA2T2)。分离条件φ(乙腈):φ(水)=70:30,流速为1.0 mL/min,检测波长为254 nm,柱温为30℃。结果:成功实现了6类多环芳烃的分离。结论:与Agilent Eclipse XDBC18柱的分离性能比较,其洗脱
目的:建立一种四氮杂杯[2]芳烃[2]三嗪固定相分离对多环芳烃的方法。方法:选用氨丙基三乙氧基硅烷作为硅烷化试剂,制备了四氧杂杯[2]芳烃[2]三嗪键合硅胶整体柱(TOA2T2)。分离条件:φ(甲醇):φ(水)=80:20,流速为1.0 mL/min,检测波长为254 nm,柱温为30 ℃。结果:成功地实现了6类多环芳烃的分离。结论:该方法对芳烃类物质分离效果较好,有一定的应用前景。
目的:提出了用一根色谱柱来实现离子交换和疏水色谱快速分离整体蛋白的新方法。方法:采用二维色谱柱为研究对象,通过考察其对标准蛋白和实际样品的分离来研究单柱二维色谱法在实际分离中的应用。结果:在选择合适的固定相、流动相、缓冲液交换方法及二次进样的条件下,在1 h内用同一根色柱完成了通常用两根色谱柱和在两种流动相条件才能实现的“二维色谱”分离。结论:通过对人血清蛋白的分离结果证明,将单柱二维色谱用于未知
目的:用色谱饼对高黏度、高蛋白负载样品的分离性能进行研究。方法:采用疏水色谱法,在不同的样品黏度和不同的进样体积条件下,研究了半制备色谱饼对四种标准蛋白质分离效果的影响。结果:不同黏度的样品分离效果差别不大,色谱饼能够将样品中的四种标准蛋白很好的分离,并且整个实验过程的系统压力基本没有升高。随着稀释倍数的增大,疏水性较弱的Cyt-c和Myo色谱峰峰形不如未稀释的色谱峰峰形对称,且峰变矮变宽,而疏水
目的:研究溶质在反相色谱中谱带宽度与溶质结构参数之间的关系。方法:在反相高效液相色谱中,以甲醇-水为流动相,在不同的甲醇浓度和不同的流动相流速时分离苯、甲苯、萘、联苯四种非极性小分子溶质,研究了在流动相流速一定的条件下,改变甲醇浓度溶质的色谱峰宽与保留时间的定量关系。结果:结果显示半峰宽与保留时间的平方根之间存在着线性关系,进一步讨论了线性方程的斜率与溶质的范德华表面积和范德华体积的关系,发现随着
目的:固定相是影响色谱分离选择性的最重要因素,因此通过将多功能基团键合到固定相表面便可增加色谱柱的选择性。方法:用弱阳离子交换-疏水相互作用二维色谱固定相和常用的离子交换型和疏水型色谱固定相进行对比来研究其对蛋白分离选择性的影响。结果:流动相pH的变化对WCX-HIC的影响更为显著一些,并且蛋白的保留顺序也与传统的HIC柱有所不同。在离子交换模式下,通过在流动相中添加有机溶剂,也可明显改变WCX-
目的:以小分子溶质、多肽和大分子蛋白质为对象,研究溶质在反相液相色谱中的动力学。方法:采用反相高效液相色谱研究了它们在不同流动相流速条件下的分离情况以及它们在动力学因素改变下的色谱行为,并得到了相应的动力学色谱规律。结果:四种小分子溶质和四种蛋白质在流速依次增大时,各溶质的保留值均减小,然而其分离情况却大不相同。不同流速时,其峰容量、分离度和出峰顺序也不尽相同。若对上述8种溶质的RRT和流动相流速