【摘 要】
:
根据猪瘟病毒株广东流行株序列,设计一对引物,并以包含E2全基因组的重组质粒pMD-E2为模板,扩增出含E2基因的主要抗原区域(360bp),回收PCR产物,将其克隆入pET-Trx的BamHⅠ和Nh
【机 构】
:
广东省农科院兽医研究所,广州,广东,510640
【出 处】
:
中国畜牧兽医学会第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会
论文部分内容阅读
根据猪瘟病毒株广东流行株序列,设计一对引物,并以包含E2全基因组的重组质粒pMD-E2为模板,扩增出含E2基因的主要抗原区域(360bp),回收PCR产物,将其克隆入pET-Trx的BamHⅠ和NheI位点间,构建原核表达质粒pET-E2,阳性重组质粒转化E.coliBL21(DE3)plyS,进行原核表达.表达蛋白质有少部分是以可溶形式存在,利用镍离子金属整合亲合层析法对可溶部分进行纯化.结果获得了纯度达90%以上的表达产物.以纯化的猪瘟病毒E2多肽为抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的兔抗猪IgG为二抗,建立了检测猪瘟病毒抗体的ELISA方法.经检测筛选出最佳反应条件为:0.8~1.6ug/ml纯化的E.coli表达的E2重组蛋白包被酶标板,用5%的小牛血清进行封闭,血清100倍稀释.试验表明应用重组E2蛋白作为诊断HCV抗原具有特异性高、抗原易纯化和成本低等特点。
其他文献
本文研究了来源于不同前体物的一氧化氮(nitrooxide,NO)对猪细小病毒(Porcineparvovirus,PPV)体外增殖的影响.结果表明,NO前体物S-硝基-N-乙酰青霉胺(SNAP)、L-精氨酸(L-Arg)
目的:研究猪流感病毒复合多表位核酸疫苗的构建及其表达产物的抗原性.方法:根据各表位基本独立的要求,结合计算机分析,以H3、H9亚型流感的HA抗原表位,H5、H7亚型的HA全基因,
用RT-PCR技术扩增了重组S21质粒载体上的猪瘟石门株E2基因的4个主要抗原结构域ABCD,A1A2,B和C.分别将4个片段克隆于pMAL-P2X载体中,经PCR、双酶切和测序鉴定,E2基因的4个主要
根据GenBank收录的猪和牛附红细胞体16SrRNA基因序列设计一对通用引物,在其上游引物内侧又分别设计了一条针对猪和牛附红细胞体的特异性引物.以这四条引物对出现典型症状及疑
团购网站成立时,他们以“低价”为卖点,通过搭建电子商务平台将原来差异性大、透明度低的本地服务通过明码标价、图文并茂的方式呈现给消费者,终于完成了本地商家的电子商务
目的:建立PCV-2感染的免疫组化诊断方法.方法:采用免疫酶染色法在细胞片上鉴定PCV-2单抗的特异性,最佳工作浓度,确立免疫组化染色的最佳程序,并对PCR检测肺脏为PCV-2阳性的临
目的:评价椎管内脊膜转移瘤的MR成像表现.方法:经组织学及临床证实的13例椎管内脊膜转移瘤患者,运用中磁场MR机,予以自旋回波序列成像.结果:依据硬膜、脑脊液在不同成像序列
目的:研究GAVM周边rCBF术中变化.方法:8例GAVM术中行LDF监测.结果:GAVM切除后,周边LDF值上升(223.48±22.06)%(P<0.001),并维持于高平台平均(69.64±11.25)min.5例LDF值升幅超
未来的控制系统是IEC61131-3算法与现场总线的组合。本文从开发新型自动控制产品的角度讨论未来控制系统的功能特点。
The future control system is a combination of IEC6
PARP的分子生物学特征,PARP的活性调节,以及PARP与缺血性神经元损伤后DNA的修复及细胞凋亡有关,探讨了PARP抑制剂,如:尼克酰胺,对缩小缺血梗死灶的作用.