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目的 通过改变氨基酸序列的方法,合成具有针对成骨细胞双重作用的多肽(RADA16-NBD),并检测其对炎症刺激下成骨细胞迁移、增值能力的影响.材料与方法:(1)水凝胶的制备:将部分多肽溶液滴于载玻片上,周围缓慢滴加适量α-DMEM放入37℃、5%CO2培养箱中1h诱导水凝胶的形成,其余多肽溶液放入4℃冰箱保存备用.(2)成骨细胞的培养:成骨细胞置基本培养基中,在37℃、 5%CO2培养箱中常规培养.(3)炎症刺激下的成骨细胞的制备:将RAW264.7细胞加入合150ng/ml的Pg-LPS的DMEM培养液,培养24h后收集上清.用三蒸水将收集的上清液稀释浓度至20%,并与细胞培养液混合,刺激成骨细胞培养24h.(4)细胞的三维培养:将细胞悬液分别与RADA16和RADA16-NBD多肽溶液等体积混合至60mm培养皿中,使其形成包裹有炎症刺激下的成骨细胞的水凝胶.在之后的60min内更换3次培养液调整PH值,然后放入37℃、5%CO2培养箱中培养,每2-3天更换一次培养液.(5)扫描电镜样本制备及观察:将载玻片上的RADA16-NBD水凝胶材料(有一半含有细胞在表面培养)用2%戊二醛固定3h,三蒸水冲洗3次,乙醇梯度脱水,冷冻干燥后喷金,用扫描电镜观察RADA16-NBD水凝胶表面结构.(6)水凝胶中炎症刺激下的成骨细胞迁移能力检测.(7)水凝胶中炎症刺激下的成骨细胞粘附能力检测:将RADA16-NBD多肽溶液浓度分别调整至0mg/L、100mg/L、200mg/L、 400mg/L.取出96孔板放入酶标仪中检测.(8)水凝胶中炎症刺激下的成骨细胞增值能力检测:取3块96孔板,将RADA16-NBD和RADA16多肽溶液浓度均调整到200mg/L,实验分为3组(标准组:单纯炎症细胞;对照组:含炎症刺激下的细胞RADA16水凝胶;实验组:含炎症刺激下的细胞RADA16-NBD水凝胶),每组6个复孔.将炎症刺激下的成骨细胞分别接种到组各水凝胶中,然后放入37℃、5%CO2培养箱中培养.分别在24h、48h和72h取出.每孔加入CCK-8试剂再放入培养箱中培养2h后取出,用酶标仪检测每孔450 nm波长的吸光度,即A值.结果:炎症刺激下成骨细胞能够在RADA16-NBD水凝胶中粘附、伸展、迁移和增值,并对炎症刺激下成骨细胞的迁移、增殖能力都有较高的表达.结论:自组装多肽水凝胶能够支持炎症刺激下成骨细胞的粘附、伸展、迁移和增殖,显示其既具有成骨又能抑制炎症活化的双重功能,为应用于炎症性骨吸收特别是牙周炎引起的骨缺损的治疗开拓一条新的方向和思路.