【摘 要】
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目的:原核表达脑膜炎球菌表面蛋白fHBP,研究其免疫原性.方法:筛选A和B两个亚家族的fHBP基因序列分别克隆至质粒pET-24b(+)和pET-28a(+),构建重组表达质粒pET-28a-/HBP-A和pET-24b fHBP-B.转化感受态细胞E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达蛋白经镍柱亲和层析和凝胶过滤层析后免疫家兔,制备多克隆抗体.采用流式细胞术、血清杀菌力试验和被
【机 构】
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上海生物制品研究所有限责任公司第三研究室,上海200051 上海市疾病预防控制中心,上海20005
【出 处】
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2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会
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目的:原核表达脑膜炎球菌表面蛋白fHBP,研究其免疫原性.
方法:筛选A和B两个亚家族的fHBP基因序列分别克隆至质粒pET-24b(+)和pET-28a(+),构建重组表达质粒pET-28a-/HBP-A和pET-24b fHBP-B.转化感受态细胞E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达蛋白经镍柱亲和层析和凝胶过滤层析后免疫家兔,制备多克隆抗体.采用流式细胞术、血清杀菌力试验和被动免疫保护试验评估抗原的免疫原性.
结果:两个蛋白的重组表达质粒成功构建.fHBP-A以包涵体形式表达,fHBP-B以可溶形式表达,纯化后纯度均高于95％.重组蛋白免疫家兔制备抗血清,经流式细胞术检测可与靶菌发生特异性结合反应,血清杀菌力试验检测到明显的杀菌反应,被动免疫保护试验证明在NIH乳鼠体内抗血清能有效清除靶菌.各项试验均呈现显著的亚家族特异性.
结论:fHBP蛋白具有良好的免疫原性,可作为B群流脑疫苗的候选抗原.
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