【摘 要】
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细胞周期蛋白激酶8(CDK8)是转录调控的关键因子。本实验在构建和测序c DNA文库获得斑节对虾(Penaeus monodon)CDK8(Pm CDK8)部分序列的基础上,利用RACE技术获得Pm CDK8 c DNA
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细胞周期蛋白激酶8(CDK8)是转录调控的关键因子。本实验在构建和测序c DNA文库获得斑节对虾(Penaeus monodon)CDK8(Pm CDK8)部分序列的基础上,利用RACE技术获得Pm CDK8 c DNA全长,使用荧光定量PCR技术对Pm CDK8在组织和卵巢发育各时期的表达进行了分析,并通过原核表达技术在体外获得了Pm CDK8重组蛋白。斑节对虾Pm CDK8 c DNA全长2851bp,开放阅读框(ORF)为1431bp,编码476个氨基酸,与豌豆长管蚜(Acyrthosiphon pisum)有较高的同源性。Pm CDK8基因在检测的各个组织中均有表达,其中在卵巢中的表达量最低;Pm CDK8在卵巢中的表达显著高于精巢中的表达;在斑节对虾卵巢发育各时期中,Ⅰ期表达量最高,表明Pm CDK8基因和卵巢发育的启动可能有关。通过原核表达技术在30℃和0.6m M IPTG条件下诱导7h获得目的蛋白最大表达。纯化的蛋白经SDS-PAGE电泳、Western blot和质谱联用技术分析表明重组蛋白为Pm CDK8重组蛋白,与预期相符合。本实验结果为研究Pm CDK8的功能奠定了基础。
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