【摘 要】
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目的：肿瘤放射治疗是肿瘤治疗的主要手段.在放射治疗的过程中,在杀死肿瘤细胞的同时,也会不可避免的产生副作用.放疗造成的皮肤损伤便是一种主要的放疗副作用.高剂量放射剂量或治疗皮肤和近皮肤肿瘤(如皮肤癌、乳腺癌等)时会造成皮肤损伤.射线通过皮肤时产生的自由基是这些皮肤损伤症状产生的主要原因.在射线的作用下,细胞清除自由基的酶的转录、翻译等过程也受到诱导而大大增强,包括超氧化物歧化酶(SOD)系列蛋白、
【机 构】
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苏州大学放射医学与公共卫生学院 苏州市立医院东区 江苏 苏州 215123
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目的：肿瘤放射治疗是肿瘤治疗的主要手段.在放射治疗的过程中,在杀死肿瘤细胞的同时,也会不可避免的产生副作用.放疗造成的皮肤损伤便是一种主要的放疗副作用.高剂量放射剂量或治疗皮肤和近皮肤肿瘤(如皮肤癌、乳腺癌等)时会造成皮肤损伤.射线通过皮肤时产生的自由基是这些皮肤损伤症状产生的主要原因.在射线的作用下,细胞清除自由基的酶的转录、翻译等过程也受到诱导而大大增强,包括超氧化物歧化酶(SOD)系列蛋白、血红素加氧酶(HO)系列蛋白、NF-kappaB和SP1等基因表达产物.如能对这些清除自由基的酶进行补充,则可以达到高效清除自由基的目的.透皮给药是对于皮肤相关疾病等的治疗是最佳的方式.透皮给药的关键是实现药物透过角质层.现有的药用蛋白质难以实现透皮给药,其原因在于大分子难以透过角质层.一般认为蛋白质透过角质层到达表皮和真皮的最大分子量是500Da.蛋白质转导结构域(protein transduction domain,PTD)是一类能够介导与其相连的物质自动进入细胞的肽段.本研究的目的是探索螺旋-环-螺旋(helix-loop-helix,HLH)结构域能否介导大分子蛋白质透皮,并在皮肤细胞中发挥偶联的蛋白质的功能.方法：在pET-28a载体中分别插入HLH结构域基因与EGFP、SOD-1及HO-1基因.构建载体转入大肠杆菌BL21菌株后,通过IPTG诱导后采用镍柱纯化.融合蛋白涂抹于大鼠背部皮肤3小手后通过免疫荧光检测目的蛋白的表达.采用CCK-8实验检测HLH融合蛋白对细胞的保护作用.结果：涂抹HLH-EGFP、HLH-SOD-1和HLH-HO-1蛋白的大鼠表皮和真皮中EGFP、SOD-1及HO-1的含量均显著高于涂抹含未有融合HLH结构域的蛋白的皮肤.HLH-SOD-1蛋白能进入体外培养的HACAT皮肤细胞中,提高细胞内SOD活性8倍作用.讨论：本研究发现了HLH结构域能介导大分子蛋白质透过大鼠角质层,到达大鼠表皮和真皮层.HLH融合的的酶具有酶活,能对细胞进行保护.
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