本实验室前期采用抑制消减杂交技术结合基因芯片技术筛选肿瘤差异表达基因,其中差异表达基因CAPZA1在高转移能力的鼻咽癌5-8F细胞中低表达.CAPZA1是肌动蛋白α1亚基基因,定位于lp13.2,编码区长861bp,与癌细胞的侵袭转移相关。 目的:通过建立CAPZAl过表达细胞系,研究CAPZAl在鼻咽癌侵袭转移中的作用。 方法:从5-8F细胞中扩增得到CAPZA1的CDs区,构建CAPZA1真核表达载体pcDNA3.1(+)/CAPZA1,脂质体2000介导pcDNA3.1(+)/CAPZA1质粒转染5-8F细胞,建立CAPZA1过表达细胞系5-8F/CAPZA1.通过MTT、细胞周期、克隆形成、划痕修复、转移小室、裸鼠成瘤等试验体内外检测细胞系生物学表型的变化;通过Western blot及RT-PCR检测侵袭转移相关基因的表达变化,分析CAPZA1影响的侵袭转移的相关下游信号通路。 结果:双酶切实验和基因测序结果显示,成功构建了CAPZA1真核表达载体pcDNA3.1(+)/CAPZA1;通过稳定转染和G418筛选,建立了CAPZA1过表达稳定细胞系5-8F/CAPZA1.细胞生物学表型实验、RT-PCR和Western blot等实验结果显示,CAPZA1表达量的高低对细胞的增殖能力没有影响,但CAPZA1过表达能够抑制鼻咽癌细胞的侵袭与转移,并且侵袭转移相关基因如E-cadherin、MMP、CD44等的表达与CAPZA1的表达呈现相关性。 结论:CAPZA1的表达与鼻咽癌细胞的侵袭转移能力相关,可能成为鼻咽癌抗肿瘤转移治疗的一个新靶点。