生物合成肽法和线性B细胞表位组学研究

来源 :第18次全国干扰素及细胞因子学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:blankduckying
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
经过10年左右的努力,完善了可用于线性表位组学研究的改良生物合成肽法改良要点:1)使用了截短的GST188蛋白作为短肽生物表达的载体,达到无需纯化表达融合蛋白,就能即便在使用抗重组蛋白多抗的场合,也能在免疫印迹鉴定中产生清晰的ECL化学发光印迹条带;2)同时构建了仅表达GST188的对照质粒,从而可方便地通过SDS-PAGE分析在LB平板上筛选8肽融合蛋白重组克隆;3)合成的8J18肽编码DNA片段尾添加了TAA终止密码子,避免了市售重组表达质粒多克隆位点区终止密码子前碱基编码4个或更多残基可能对免疫印迹结果的干扰;4)使用了操作更经济简便的热诱导细菌表达系统等。优点:简便、经济、结果可靠,适合普通生物学实验室运用。 鉴于用生物合成肽法和兔抗重组蛋白多抗的抗原表位组学研究结果,内容至少应该包括三个目标:1)通过表位扫描作图,揭示一个或多个同源蛋白乃至一物种全部编码蛋白的精细完整线性表位组(epitome);2)通过基于各鉴定表位最小基序的同源蛋白序列比较,确定它们的保守性和特异性;3)发现解码的表位组中抗体中和性或功能性表位。前二者目标己在人乳头瘤58型病毒(HPV58)三个主要蛋白E6, E7和L1的表位组学研究中予以实现,后者目标也是完全可以想见的,因为通过制备基于各精细表位的单抗或合成肽多抗,结合抗病毒中和实验就能实现(以往多以鉴定或计算机预测的一个抗原性肽开展这一研究)。
其他文献
会议
会议
会议
会议
会议
会议
背景:细胞穿膜肽(Cell-penetrating peptides,CPPs)是一类可以携带生物大分子跨膜进入细胞的短肽,作为一种有效的胞内分子运载工具,有着广泛的应用前景.新近鉴定一种新型的人源性细胞穿膜肽(命名为hPP10),具有优于TAT的穿膜效率、安全性高等特点.KLA(KLAKLAKKLAKLAK)是一段能够破坏线粒体膜,导致线粒体释放细胞色素c,从而诱导细胞发生凋亡的短肽.KLA自身
背景:细胞穿膜肽(Cell-penetrating peptides,CPPs)是一类可以携带生物大分子跨膜进入细胞的短肽,作为一种有效的胞内分子运载工具,有着广泛的应用前景.新近鉴定一种新型的人源性细胞穿膜肽(命名为hPP10),具有优于TAT的穿膜效率、安全性高等特点.凋亡素(Apoptin)是鸡贫血病毒基因VP3编码的,由121个氨基酸组成的蛋白分子,可选择性诱导肿瘤细胞凋亡.目的:探讨新型
ANGPTL1基因是ANGPTLs(血管生成素相关蛋白)家族的一个成员,它对血管发生、内皮细胞的保护及胚胎器官发生等方面有重要作用.为探究血管生成素相关蛋白1(ANGPTL1)在肿瘤转移进程中的作用机制,从人肝cDNA文库中经PCR扩增出ANGPLT1基因及其C端FD domain,经纯化、回收目的片段,将其插入克隆载体pcDNA3.1/His-Myc(-)B,构建ANGPTL1的过表达载体,转染
重组人促红细胞生成素生物活性分析方法主要包括体内法和体外法.报告基因法的原理是:药物作用于细胞后,通过信号通路最终激活或失活特定的将转录因子的特定DNA反应元件插转录因子,从而引起某些基因的表达提高或降低。入报告基因的启动子区,并导入药物反应性细胞,通过检测药物作用后报告基因表达的变化来测定药物的生物学活性。报告基因法以其准确,简便,快速等优点已成功应用于多种生物技术药物生物活性的测定.报告基因法