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目的：建立高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法测定胆酸、脱氧胆酸、鹅脱氧胆酸、石胆酸、甘氨胆酸、甘氨鹅脱氧胆酸、牛磺胆酸、牛磺脱氧胆酸、牛磺鹅脱氧耻酸九种胆汁酸亚组分浓度的方法。方法：采用色谱柱LunaC18(2)柱(150/4．6mm，5μm、)，柱温30℃，流动相以10mmol·L-1乙酸氨为流动相A、乙腈-甲醇(3：1)为流动相B梯度洗脱，流速：0．6ml/min，血浆样品经乙腈沉淀蛋白后进样，MRM模式定量。结果：HPLC-MS/MS法测定胆汁酸九种亚组分浓度的最低检测限为0．50ng·ml-1～8．00ng·ml-1;日内和日间变异系数均小于10％;回收率在92．75％～110．07％之间。结论：所建HPLC-MS/MS法灵敏、准确，重现性好，适用于测定血浆中九种胆汁酸亚组分含量，够为临床及科学研究提供可靠的数据参考。