【摘 要】
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本实验旨在建立一种将环介导等温扩增(LAMP)与荧光染料Propidium Monoazide (PMA)相结合的检测方法,能够有效的区分乳中沙门氏菌的死活菌.通过优化PMA孵育温度、曝光时间
【机 构】
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东北农业大学食品学院 哈尔滨 150030
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本实验旨在建立一种将环介导等温扩增(LAMP)与荧光染料Propidium Monoazide (PMA)相结合的检测方法,能够有效的区分乳中沙门氏菌的死活菌.通过优化PMA孵育温度、曝光时间以及PMA浓度来确定PMA最佳处理条件.以PMA-LAMP法和PMA-PCR法分别检测乳中的沙门氏菌考察本方法的灵敏度.最后分别以四株沙门氏菌和其他23株致病菌的DNA提取物为模板,进行LAMP特异性实验.结果表明,活沙门氏菌经过95℃热处理3 min,用终浓度3μg/mL的PMA处理菌体,在黑暗下孵育3 min,再置于650W卤素灯下曝光5 min后的DNA模板,不会产生LAMP扩增.乳中PMA-LAMP的检测限为4.9×101 cfu/mL,比PMA-PCR法灵敏100倍.特异性实验中,四株沙门氏菌得到阳性扩增结果,特异性良好.该方法可以作为一种快速检测乳中沙门氏活菌的新技术.
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