间歇低氧致人脐静脉内皮细胞凋亡与线粒体细胞色素C释放相关

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目的应用间歇低氧(IH)刺激人脐静脉内皮细胞(HUVECs),观察IH致线粒体损伤及其凋亡通路的变化,探讨线粒体结构功能的改变在IH致血管内皮损伤中的作用。方法研究分为IH组和对照组,IH组HUVECs细胞接受间歇低氧刺激,即1%O2 5min与21%O2 5min循环交替(37℃C,5%CO2),分别处理8小时、16小时与24小时;对照组则置于普通孵育箱(37℃,5%CO2)内,处理24小时。应用Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡率;电镜观察细胞线粒体结构变化;应用差速离心法分离HUVECs胞浆与线粒体,分别检测各组分中细胞色素C(cytC)的蛋白含量。分析cytC的释放与细胞凋亡之间的关系。结果经16小时IH处理后,HUVECs细胞内线粒体结构发生明显变化,出现线粒体肿胀、嵴断裂、空泡化等现象;而对照组线粒体超微结构仍保存完整。经不同IH时间点(8小时、16小时、24小时)处理的HUVECs的细胞凋亡率分别为(6.7±0.60)%、(8.86±1.19)%、(9.61±1.27)%,均显著高于对照组细胞凋亡率(2.45±0.80)%;且凋亡率随IH处理时间延长而增加(P<0.05)。胞浆cytC含量与细胞早期凋亡率正相关(r=0.9876,p=0.0124)。结论 IH可致人脐静脉内皮细胞线粒体内cytC释放入胞浆与凋亡率增加相关,可能是IH致内皮细胞损伤的机制之一。
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