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本实验选取ALS4和ALS9基因为研究对象,检测ALS基因mRNA在白念珠菌不同生物状态的表达水平。探索ALS基因在菌相转换以及生物膜形成中可能发挥的作用。
选用白念珠菌标准株3株,临床株10株。将13株念珠菌分别在不同培养基上培养成不同的生物状态包括酵母状态、芽管状态(菌丝早期)、浮游状态和生物膜状态。应用Trizol法提取各种状态白念珠菌总RNA,应用RT-PCR两步法试剂盒将RNA进行反转录合成cDNA,设计合成ALS4,ALS9基因和管家基因ACT1基因的特定引物并进行PCR扩增,然后2%琼脂糖凝胶电泳,EB显色,凝胶成像系统成像,以ACT1基因为内对照进行图像分析软件分析电泳结果。
结果显示临床株和标准株白念珠菌ALS4和ALS9基因mRNA芽管状态的相对表达量高于酵母状态(P均<0.05);临床株和标准株白念珠菌ALS4和ALS9基因mRNA生物膜状态的相对表达量高于浮游状态(P均<0.05)。白念珠菌的菌相转换(从无致病性的酵母相转变为有致病性的菌丝相)和生物膜(酵母相转变为菌丝相是关键步骤)形成过程中必伴随着基因表达的变化和调控。推测相关的致病基因ALS基因可能表达增高来参与调控和致病。本研究证实ALS4和ALS9基因mRNA在芽管状态和生物膜状态表达增高,与国外相关研究一致,表明这两种基因在白念珠菌致病过程中如菌相转换和生物膜形成中起重要作用。