【摘 要】
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本文运用PCR技术,分别从大肠杆菌TB1、107/86和C83907菌株中扩增出不舍信号肽序列的Stx2eB亚单位基因(stx2eB)、F18菌毛的A亚单位基因(fedA)和F4菌毛亚单位基因(faeG),将这3
【机 构】
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扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室,扬州,225009
【出 处】
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中国畜牧兽医学会第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会
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本文运用PCR技术,分别从大肠杆菌TB1、107/86和C83907菌株中扩增出不舍信号肽序列的Stx2eB亚单位基因(stx2eB)、F18菌毛的A亚单位基因(fedA)和F4菌毛亚单位基因(faeG),将这3个基因的PCR扩增产物按预定阅读框架克隆入pGEX-6P-1载体的谷胱甘肽S-转移酶(GST)基因的下游,对构建的重组质粒pFSFaeG进行酶切分析和核苷酸序列分析,结果表明,插入的片段与预期一致,且阅读框正确.重组质粒在宿主菌BL21中的表达产物经SDS-PAGE初步分析,发现表达产物与谷胱甘肽转移酶相融合,重组融合蛋白的分子量约为80kD.用表达FedA-Stx2eB-FaeG的重组菌BL21(pFSFaeG)灭活苗对5周龄的ICR小鼠进行腹腔免疫,结果显示经重组菌免疫后的小鼠血清中,产生了分别针对F4、F18、Stx2e抗原特异性的IgG,相应的抗体水平从免疫后7d开始逐步升高,在第二次免疫后21d左右达到了较高的水平,并且在攻毒后对小鼠提供了较好的保护,免疫保护率均达80％以上.
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