【摘 要】
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本研究利用坦布苏病毒(TMUV) NS1蛋白单抗进行NS1蛋白亚细胞定位及B细胞表位的筛选.以TMUV NS1蛋白为免疫原,制备单抗.TMUV转染BHK21细胞后,用NS1单抗进行间接免疫荧光.DAPI染色后,激光共聚焦显微镜观察,NS1蛋白定位于细胞质.设计覆盖NS1基因全长35对引物,退火形成35条片段(含16AA).构建35个截短NS1基因原核重组载体并表达.NS1单抗为一抗,35段短肽为抗
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本研究利用坦布苏病毒(TMUV) NS1蛋白单抗进行NS1蛋白亚细胞定位及B细胞表位的筛选.以TMUV NS1蛋白为免疫原,制备单抗.TMUV转染BHK21细胞后,用NS1单抗进行间接免疫荧光.DAPI染色后,激光共聚焦显微镜观察,NS1蛋白定位于细胞质.设计覆盖NS1基因全长35对引物,退火形成35条片段(含16AA).构建35个截短NS1基因原核重组载体并表达.NS1单抗为一抗,35段短肽为抗原,通过ELISA法筛选到6个16AA短肽,Western-Blot和Dot-ELtSA进行鉴定.选择2个16AA短肽(ELISA效价高)进一步截短表达,分别截掉5端或3端2个、4个、6个、7个、8个AA,构建20个原核载体并表达.通过ELISA获得2个6 AA B细胞表位.本研究完成了NS1蛋白亚细胞定位,获得2个B细胞表位,为研究TMUV鉴别诊断方法及NS1蛋白免疫机制奠定基础.
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鸭瘟病毒感染水禽(鸭、鹅等)常常造成严重的发病和死亡,解析鸭瘟病毒UL54基因及其编码ICP27蛋白的特性和功能,对于阐明鸭瘟病毒的致病机理至关重要。本研究对鸭瘟病毒UL54基因进行克隆、原核表达、蛋白纯化和抗体制备；分别用实时荧光定量PCR和免疫印迹分析转录时相和表达时相；用免疫荧光法对UL54蛋白进行细胞内定位分析；用种间异核体技术解析UL54蛋白的核质穿梭活性及其功能区；构建基于BAC的UL
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