【摘 要】
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目的 构建hsa-miR-26b沉默载体,与其已知靶基因PTEN共转染HEK-293T细胞验证其沉默效果,为后续功能研究提供实验的物质基础.方法 根据海绵体技术,设计并合成与hsa-miR-26b成熟序列反向互补的3个重复序列的双链DNA,将退火所得的shDNA克隆入LV3-GFP-Puro载体,转染与其已知靶基因PTEN共转染HEK-293T细胞,于24h后收集细胞RNA采用Real-time
【机 构】
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南京医科大学附属南京妇幼保健院儿童保健科 210008
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目的 构建hsa-miR-26b沉默载体,与其已知靶基因PTEN共转染HEK-293T细胞验证其沉默效果,为后续功能研究提供实验的物质基础.方法 根据海绵体技术,设计并合成与hsa-miR-26b成熟序列反向互补的3个重复序列的双链DNA,将退火所得的shDNA克隆入LV3-GFP-Puro载体,转染与其已知靶基因PTEN共转染HEK-293T细胞,于24h后收集细胞RNA采用Real-time PCR技术检测hsa-miR-26b表达水平,同时采用双荧光素报告系统检测其对靶基因的作用.
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