【摘 要】
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目的 构建人miR-146b慢病毒表达载体,包被病毒并检测其在人脂肪细胞中过表达效果.方法 以人基因组DNA为模板,PCR高保真扩增包含miR-146b区域上下游各100bp左右的基因组DNA,亚克隆入慢病毒表达载体,与包装质粒共转染HEK-293T细胞,包装病毒,收取病毒上清,纯化后感染人脂肪前体细胞,36h小时开始观察荧光标记,72小时收取细胞,抽提RNA,Realtime PCR检测慢病毒感
【机 构】
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南京医科大学儿科研究所 南京医科大学儿科研究所;南京医科大学市妇幼保健院
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目的 构建人miR-146b慢病毒表达载体,包被病毒并检测其在人脂肪细胞中过表达效果.方法 以人基因组DNA为模板,PCR高保真扩增包含miR-146b区域上下游各100bp左右的基因组DNA,亚克隆入慢病毒表达载体,与包装质粒共转染HEK-293T细胞,包装病毒,收取病毒上清,纯化后感染人脂肪前体细胞,36h小时开始观察荧光标记,72小时收取细胞,抽提RNA,Realtime PCR检测慢病毒感染下miR-146b的相应表达量.
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