【摘 要】
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目的:肺炎支原体(Mycoplasmapneumoniae,MP)是儿童、青少年及成人上、下呼吸道感染的常见病原体,对儿童健康危害严重。MP大环内酯类耐药逐年增多。MP的常规诊断方法不能给出
【机 构】
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首都医科大学附属北京友谊医院北京热带医学研究所;
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目的:肺炎支原体(Mycoplasmapneumoniae,MP)是儿童、青少年及成人上、下呼吸道感染的常见病原体,对儿童健康危害严重。MP大环内酯类耐药逐年增多。MP的常规诊断方法不能给出耐药信息,对临床治疗指导意义有限。本文拟建立荧光定量PCR等位基因鉴别方法,对MP2063位基因型进行鉴定,在诊断的同时给出耐药信息,以指导临床实践。方法:采用实时定量PCR技术,以23SrRNA为靶序列,设计不同基因型探针及引物,构建阳性质粒,建立标准曲线。并采用此方法检测临床分离株和咽拭子标本。结果:本方法对所构建2063A及2063G阳性质粒检测极限分别达6和60拷贝。仅与生殖支原体有交叉。43株临床分离株基因型检测,显示在均有扩增,Ct值在26.82~34.25之间,拷贝数分布在2.05×104~2.95×106之间。其中6株2063位为A,为敏感株;37株2063位为G,为耐药株;耐药率为86.05%。测得的43株临床分离株2063位基因型与巢式PCR后测序结果完全一致。表明采用实时定量PCR方法能够准确反映临床分离株2063位耐药基因型。利用所建立的方法检测12例鼻咽拭子标本,阳性率为83.33%(10/12),耐药率为33.33%(4/12),首次发现一例耐药株和敏感株合并感染。结论:本研究初步建立了一种新诊断MP感染和耐药基因型的实时定量PCR方法。与传统23SrRNA巢氏PCR方法相比,该方法快速、敏感,为临床提供个一项快速诊断耐药MP的方法。
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