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目的：建立反相高效液相色谱-质谱法测定人血浆中罗红霉素浓度。方法：采用API 3000型LC-MS/MS液质联用系统，Ultimate C18分析柱(50×4．6mm，5μm)，流动相为甲醇：水=80：20(含0．1％甲酸)，流速0．3 ml·min-1。样品在碱性条件下用二氯甲烷提取浓集后进样，MRM模式检测(离子对837．5/679．5)，克拉霉素为内标，按内标法定量。结果：罗红霉素和内标的保留时问分别为2．39min和2．36min，标准曲线在10～10000 ng·mL-1范围内线性良好，最低定量限10 ng·-1，日内RSD小于3．4％，日间RSD小于2．69％，方法同收率98．8％～106．6％，萃取回收率70．7～73．7％。结论：本法具有快速简便、灵敏准确等特点，与已有文献报道相比有更好的灵敏度和特异性。适用于血浆中罗红霉素浓度测定及药代动力学、生物利用度研究用。