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目的:建立反相高效液相色谱-质谱法测定人血浆中罗红霉素浓度。方法:采用API 3000型LC-MS/MS液质联用系统,Ultimate C18分析柱(50×4.6mm,5μm),流动相为甲醇:水=80:20(含0.1%甲酸),流速0.3 ml·min-1。样品在碱性条件下用二氯甲烷提取浓集后进样,MRM模式检测(离子对837.5/679.5),克拉霉素为内标,按内标法定量。结果:罗红霉素和内标的保留时问分别为2.39min和2.36min,标准曲线在10~10000 ng·mL-1范围内线性良好,最低定量限10 ng·-1,日内RSD小于3.4%,日间RSD小于2.69%,方法同收率98.8%~106.6%,萃取回收率70.7~73.7%。结论:本法具有快速简便、灵敏准确等特点,与已有文献报道相比有更好的灵敏度和特异性。适用于血浆中罗红霉素浓度测定及药代动力学、生物利用度研究用。