【摘 要】
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目的：构建携带针对大鼠RARβ基因的siRNA重组腺病毒,并感染ATRA处理的骨髓间充质干细胞(MSCs),检测RARβ的表达,为进一步研究维甲酸信号转导通路在MSCs成神经分化中的作用
【出 处】
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国际发育与疾病高峰论坛暨第六届儿童保健高层论坛、重庆市儿科年会
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目的：构建携带针对大鼠RARβ基因的siRNA重组腺病毒,并感染ATRA处理的骨髓间充质干细胞(MSCs),检测RARβ的表达,为进一步研究维甲酸信号转导通路在MSCs成神经分化中的作用机制奠定重要基础.方法：设计针对大鼠RARβ的四对siRNA的DNA序列,体外退火形成双链,将其定向克隆至腺病毒穿梭质粒pSES-HUS,随后与腺病毒骨架质粒pAd-Easyl在βJ5183细菌中同源重组,并在HEK293细胞中包装获得重组腺病毒Ad-siRAR β.腺病毒感染大鼠MSCs后经AT RA处理24h,Realtime、 Western blot及免疫荧光检测RARβ的表达情况.结果：PCR、酶切及测序鉴定均证实siRNA正确克隆至腺病毒质粒中,腺病毒感染MSCs可观察到60％以上的细胞有RFP表达.RARβ表达定位于细胞核,ATRA作用后MSCs中RARβ表达明显增高,有3组siRNA能抑制ATRA诱导的RARβ表达增强,且以pool组效果最强(p＜ 0.01).结论：成功构建了携带针对大鼠RAR基因的siRNA重组腺病毒,能有效感染MSCs并显著抑制ATRA诱导的RARβ表达增强.
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