【摘 要】
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马铃薯腐烂茎线虫(Dttylenchus destructor)引起的甘薯茎线虫病,给我国的甘薯产业生产造成了严重损失.在实际生产中线虫的防治主要为化学防治,药剂主要有机磷类、氨基甲酸酯类等.因马铃薯腐烂茎线虫对不良环境具有很强的耐受力,可选择的杀线虫剂品种又很有限,目前茎线虫病的防治非常困难.田间防治中大量的施用化学药剂,不仅会污染环境,还将造成其抗药性水平增加进而其用药量增加的恶性循环.线虫病
【机 构】
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河北省农林科学院植物保护研究所/河北省农业有害生物综合防治工程技术研究中心/农业部华北北部作物有害生物综合治理重点实验室,保定071000
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马铃薯腐烂茎线虫(Dttylenchus destructor)引起的甘薯茎线虫病,给我国的甘薯产业生产造成了严重损失.在实际生产中线虫的防治主要为化学防治,药剂主要有机磷类、氨基甲酸酯类等.因马铃薯腐烂茎线虫对不良环境具有很强的耐受力,可选择的杀线虫剂品种又很有限,目前茎线虫病的防治非常困难.田间防治中大量的施用化学药剂,不仅会污染环境,还将造成其抗药性水平增加进而其用药量增加的恶性循环.线虫病的防治工作面临严峻形势.因此,急需开发一种新的线虫控制方法,例如通过dsRNA/siRNA介导的基因沉默(RNAi)来开发抗线虫类作物即具有很好的前景.秀丽小杆线虫的UNC-87蛋白是线虫体壁肌肉的重要组成部分,在线虫的运动中发挥着重要的作用.本研究对马铃薯腐烂茎线虫的unc-87同源基因(Dd-unc-87)进行了研究,其cDNA序列长1 471bp,ORF区域长为1134bp,编码一个含377个氨基酸的蛋白质,预测蛋白分子量为42ku,等电点为7.08；UNC-87蛋白含有7个Calponin-like结构域,N端没有信号肽,预测其可能存在于细胞核中.Dd-unc-87的基因组序列长为7 369 bp,基因组结构中包含12个外显子,11个内含子.Southern杂交结果显示用XbaI和EcoRI酶切的基因组泳道中只出现一条带,可得unc-87在基因组中为单拷贝基因.将所得cDNA基因序列进行Blastx比对和系统发育分析结果显示马铃薯腐烂茎线虫与松材线虫的亲缘关系最近,其次为大豆孢囊线虫和根结线虫.用来自unc-87两端和中间的三个靶位点片段dsRNA处理线虫24h后,qPCR结果显示靶基因的沉默效率最高的为2号区段dsRNA处理线虫,所以利用2号段dsRNA来进行下面的实验.受unc-87基因2号区段dsRNA处理的线虫靶基因表达量显著降低；沙柱通过率与对照组差异不显著；在胡萝卜上的繁殖量要显著的低于对照组,下降约49％.说明unc-87基因可能在线虫迁移中的作用不明显,而在线虫的繁殖中发挥正调控的作用.
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马铃薯腐烂茎线虫(Ditylenchus destructor)是重要的迁移性植物内寄生线虫，主要为害植物地下部尤其是块根、块茎和球茎等，也是国内外重要的检疫性线虫。该线虫引起甘薯茎线虫病，给我国的甘薯生产造成严重损失。传统的防治马铃薯腐烂茎线虫的方法 主要有轮作、选用抗耐病品种和施用杀线剂等，但是受耕地面积、甘薯遗传上的高度杂合性、易诱发线虫产生抗性和造成环境污染等限制，上述措施的应用受到限制。