【摘 要】
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目的：探讨PPARα的特异性外源性激活物非诺贝特对人肝瘤细胞HepG2细胞PAI-1基因表达的影响和调控机制。 方法：不同浓度非诺贝特刺激HepG2细胞,RT-PCR法检测PAI-1和PPARα mRNA水平。构建四个含PAI-1启动子序列从-804至+17间系列缺失体片段驱动的荧光素酶报告基因质粒,转染HepG2细胞,初步确定位于PAI-1启动子序列-804至+17之间的Smad3/4结合元件
【机 构】
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白求恩国际和平医院心血管内科,石家庄 050082 解放军总医院南二科,北京 100853
【出 处】
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第14届中国南方国际心血管病学术会议
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目的：探讨PPARα的特异性外源性激活物非诺贝特对人肝瘤细胞HepG2细胞PAI-1基因表达的影响和调控机制。
方法：不同浓度非诺贝特刺激HepG2细胞,RT-PCR法检测PAI-1和PPARα mRNA水平。构建四个含PAI-1启动子序列从-804至+17间系列缺失体片段驱动的荧光素酶报告基因质粒,转染HepG2细胞,初步确定位于PAI-1启动子序列-804至+17之间的Smad3/4结合元件(SBE)具有调控作用,采用重叠PCR法对该元件进行定点突变并构建相应重组质粒,转染HepG2细胞。WesternBlot法检测非诺贝特诱导下HepG2细胞中Smad3和Smad4的蛋白表达水平。
结论：PPARα的特异性外源性激活物非诺贝特可从转录水平抑制HepG2细胞中PAI-1基因的表达，PPARα与PAI-1启动子上的Smad3/4结合元件即SBE参与非诺贝特对HepG2细胞PAI-1基因的转录调控，这一过程涉及到Smads蛋白及其介导的Smad信号转导通路。
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