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[目的]通过比较研究Real Time Cell Analyze (RTCA)实时监测方法及Alamar Blue法测定纳米氧化铜体外作用于人胚肺成纤维细胞MRC-5的毒性作用,探讨RTCA实时监测技术用于测定纳米材料体外细胞毒性的可行性.[材料和方法]分别将MRC-5细胞接种于RTCA配套16孔板中及普通96孔板中,接种密度为1×105个/ml,96孔板中细胞用于Alamar Blue法测定细胞毒性.接种24 h后用不同浓度的纳米氧化铜混悬液进行染毒,染毒剂量分别为3mg/ml、1.5mg/ml、0.75mg/ml、0.38mg/ml、0.19mg/ml、0.094mg/ml、0.047mg/ml,另设空白对照组.Alamar Blue法组细胞分别在染毒后12h、24 h、36h、48 h、60 h,吸弃染毒液,加入Alamar Blue染料,培养箱内继续放置4h,用连续波长微孔板分度光度计进行测定.检测用激发波长为530 nm,发射波长为590 nm,测得相对荧光强度,计算得抑制率.通过抑制率计算各时间点纳米氧化铜作用于MRC-5细胞的IC50值.RTCA法中只需将染毒后的16孔板放置于RTCA仪中,对细胞的生长状态进行实时监测.同时在RTCA分析模块中选择12h、24h、36h、48 h、60 h时间点得到剂量-效应关系拟合曲线及相应的IC50值.采用SPSS16.0分析软件,利用配对T检验,对RTCA实时监测法及Alamar Blue法所得相同时间点的IC50值进行统计分析,判断其相关性及是否存在差异.[结果]RTCA法测定染毒后12h、24h、36h、48h、60h的IC50值及拟合曲线R2分别为452μg/ml、R2=0.988, 184μg/ml、R2=0.992, 133μg/ml、R2=0.996, 118μg/ml、R2=0.994, 86.9μg/ml、R2=0.989. Alamar Blue法所得相同时间点的IC50值分别为507μg/ml、176μg/ml、129μg/ml、104μg/ml、91.5μg/ml.两种方法所测得IC50值进行统计分析,其差值经正态性检验W=0.845,p=0.180,差值服从正态分布.两组IC50值相关系数为0.997,p=0.00,具有显著相关性.经配对T检验,t=0.767,p=0.486,无明显差异.[结论]RTCA实时监测法与Alamar Blue法在相同时间点测定纳米氧化铜作用于MRC-5细胞的IC50值无明显差异,说明RTCA实时监测法测定体外细胞毒性结果可靠.该方法基于微电子阻抗技术,用于纳米材料的毒性测试可以避免纳米材料因团聚、沉积等状态对测定结果的影响.而且该方法可用同一批细胞在多个连续时间点进行长时间监测,可避免不同批细胞的组间差异,且能实时观察到细胞毒性起始及随着时间变化所产生的变化.因此认为该方法适用于纳米材料的体外毒性研究.