真菌淀粉酶在黑曲霉中的表达及蛋白质工程改造

来源 :第七届中国工业生物技术发展高峰论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:very_god
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  真菌淀粉酶是由曲霉属微生物发酵产生的一种淀粉酶。与细菌淀粉酶不同的是,真菌淀粉酶的最适作用温度为55℃左右,超过60℃开始失活;其水解淀粉的产物主要是高含量的麦芽糖和一些低聚糖及少量的葡萄糖。真菌淀粉酶广泛地应用于饲料和食品市场如饲料添加剂、淀粉糖浆、低聚糖、烘焙食品、面制品等的生产。开发新型真菌淀粉酶使其运用于饲料和食品市场,可为饲料和食品市场提供新型真菌淀粉酶,替代国外公司的现有产品,打破国际公司在中国的垄断。目前国外主要酶制剂公司诺维信、丹尼斯克和帝斯曼来源于米曲霉微生物发酵的真菌淀粉酶已占领国内大部分市场。本实验室从从米曲霉、棒曲霉、黄曲霉、土曲霉、泡盛曲霉、烟曲霉、费希新萨托霉、产黄青霉、绳状青霉、马尔尼菲青霉、葡萄穗霉和粉红粘帚霉12株菌中筛选并克隆出26个淀粉酶,其中13个真菌淀粉酶在黑曲霉中得到表达。来源于棒曲霉的2个淀粉酶:AclaP11和AclaP15有较好的酶学特性,耐热性较好,蛋白表达量大于10克/升。对上述2个酶使用“保守性氨基酸位点突变”的方法,通过蛋白分子结构分析和保守性氨基酸位点基因突变的筛选,共进行了10个位点的突变,其中2个位点突变后,酶活提高了近50%。该成果为工业酶蛋白质改造提供了新的思路。
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