生物柴油是一种可再生燃料,具有完全取代化石燃料的潜力,然而,生物柴油生产过程中有10％的副产物粗甘油生成,如何处理这些副产物粗甘油,对于生物柴油产业发展来说是一个必须关注的问题.为了进一步提高菌株B10-127对甘油利用效率和2,3-丁二醇产量，我们首先过量共表达了参与NADH/NAD+循环再生的关键酶甘油脱氢酶和乙偶姻还原酶，提高了2,3-丁二醇合成过程中辅酶再生效率和对NADH的竞争力；ALsR转录调控因子主要调控2,3-丁二醇合成支路乙酰乳酸合成酶（Als）和乙酰乳酸脱羧酶(AldC)的表达，随后，通过利用研究室筛选获得的PbdhA启动子适度表达了ALsR转录调控因子，提高Als和AldC表达水平，提高了2,3-丁二醇合成支路对C流的竞争力；最后，基于我们发现的乙偶姻还原酶在氧化方向和还原方向具有不同的pH偏好性和对溶氧需求不同的特征，我们提出了一个双阶段控制pH和三阶段控制溶氧的策略。最终，已粗甘油为底物，2,3-丁二醇最高产量达到102.3 g/L，这是目前报道的甘油合成2,3-丁二醇的最高产量。