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目的:内皮祖细胞(EPCs)的衰老及功能降低是致高血压心血管病变的重要因素之一。天然药物吴茱萸次碱(RUT)具有明显降压和改善内皮功能作用,其机制与激动辣椒素受体(VR1),促进降钙素基因相关肽(CGRP)有关。本实验拟在确证。EPC表达VR1/CGRP基础上,在高血压大鼠模犁和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)处理培养的EPCs研究RUT对EPCs衰老的影响及其机制。
方法:①在自发性高血压火鼠(SHR),观察不同剂量的RUT对骨髓EPCs衰老的影响。②分离培养人脐静脉血EPCs,观察不同浓度RUT对AngⅡ诱导细胞衰老的影响。分别检测衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)活性(酸性β-gal染色法)和端粒酶活性(TRAP-银染法)反映EPCs衰老程度。Real TimePCR法检测CGRP α、β、VR1以及抗衰老基因Klotho mRNA表达:放射免疫法及ELISA法测定血浆和培养液中CGRP水平。
结果:①大鼠骨髓和人脐血EPCs均表达VR1及CGRPα、β。灌胃给予RUT(10、20和40 mg/kg)2周能剂量依赖性改善SHR骨髓EPCs衰老程度(β-半乳糖苷酶表达下调及端粒酶活性增高),同时伴有血浆和培养液CGRP浓度增高以及CGRPα、β mRNA表达上调。②RUT(10-7.10-5 M)浓度依赖性抑制Ang Ⅱ(10-6M,48 h)诱导的EPCs衰老,同时伴有培养液CGRP浓度增高以及CGRP α、β和.KlothomRNA表达上调,其效应可被VR1受体阻断剂capazepine(10-5 M)或CGRP受体特异性阻断剂CGRP8-37(10-5 M)所阻断。
结论:RuT能显著抑制高血压EPCs衰老,其机制与激活EPCs VR1/CGRP系统,上调抗衰老基因 Klotho表达有关。